[1]复旦大学附属浦东医院心内科,上海 200000
[2]宁波市医学科学研究所药物与药理研究室,浙江宁波 315000
目的:通过慢病毒载体沉默心肌细胞细胞系H9C2中C-SKI(c-ski)基因的表达,探讨C-SKI基因沉默后对心肌细胞细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法:应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测SW620,HT-29,LoVo,H9C2及RKO细胞系中C-SKI的表达状况;设计人C-SKI基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染C-SKI高表达的心肌细胞细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对C-SKI基因的沉默效果;C-SKI基因沉默后通过MTT实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果:C-SKI在H9C2中高表达,构建C-SKIshRNA慢病毒载体沉默H9C2细胞中C-SKI的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,C-SKI稳定沉默的H9C2细胞构建成功。在稳定沉默C-SKI基因后,MTT法显示C-SKI沉默不会影响细胞的增殖能力。细胞小室实验结果显示,C-SKI沉默后H9C2侵袭和迁移能力均增强(P<0.001)。结论:C-SKI基因能够一定程度上抑制心肌细胞的迁移和侵袭,进而参与了心肌细胞纤维化的发生发展。
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