目的体外检测缓释不同浓度FK506的多孔PLA/β-TCP支架对间充质干细胞成骨诱导作用的研究。方法利用微米级β-TCP高能球磨法制备纳米级β-TCP(Nβ-TCP),将聚乳酸(PLA)与纳米β-TCP颗粒混合制得β-TCP质量百分比为30%的混合溶液(70PLA/30β-TCP),再称取不同比例的FK506加入上述溶液中,混合均匀后注入特制的聚四佛乙烯模具,冻干后制备表面修饰了不同FK506质量百分比浓度的多孔支架材料,制成统一5mm×5mm×3mm大小。利用ELISA试剂盒检测上述含不同FK506浓度的支架材料分别在0.33、0.66、1、2、6、12、24、48、96、144、336、720h时间点药物缓释情况,初步明确其药物缓释曲线。另取来自人的骨髓间充质干细胞(BMSCs)用荧光染料DiI标记后,以1×10~6/30μl接种于不同FK506浓度的多孔支架,体外共培养2周,其中培养1周时随机取支架-细胞复合物在电镜下观察。在培养1周、2周时,分别取培养液进行OCN检测,取出复合细胞的多孔支架经研磨、裂解后进行ALP检测。结果成功获得5种含FK506不同质量百分比(0%、2%、4%、6%、8%)的纳米级PLA/β-TCP多孔支架。获得了上述经FK506修饰的多孔支架的药物缓释曲线,6%组的FK506的释放量较其他各组均有增高。细胞-支架培养1周后电镜观察示BMSCs在多孔支架内生长良好。支架与细胞共培养1周时,5种不同浓度的多孔支架经裂解、研磨后,发现6%质量百分比的支架ALP值较其他各组高,但经统计学分析,5组间未见统计学意义;2周时,各组的ALP均值较前有增高,6%组与其他几组均有统计学意义(P<0.05)。而在支架与细胞共培养后1周时,对5种不同浓度的多孔支架的培养液进行OCN检测,发现6%组OCN检测值较其他各组均有增高(P<0.05);而在2周时,6%组与8%组OCN值均较其他各组明显增高,经统计学分析,6%组与8%组均较其他3组有统计学意义(P<0.05),但该两组间未见明显统计学差异(P>0.05)。结论 BMSCs可以在经FK506表面修饰的纳米级多孔PLA/β-TCP内生长,6%组多孔支架有较好的药物缓释曲线,同时对该组在体外复合BMSCs后其ALP及0CN检测,初步认为6%质量百分比的经FK506修饰的N-PLA/β-TCP在体外促成骨方面可能有一定的优势。
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