目的:探讨不同冻存液对人诱导性多能干细胞(iPSC)冻存复苏后的存活率及诱导分化的影响,筛选出简单有效的冻存与复苏方法.方法:人iPSC培养至第3代后分组冻存:①含有不同配比胎牛血清(FBS)的细胞冻存液分组:A组[80％培养基(DMEM/F 12)+10％FBS+10％二甲亚砜(DMSO)];B组(70％DMEM/F12+20％ FBS+10％ DMSO);C组(40％DMEM/F 12+50％FBS+ 10％DMSO);D组(90％FBS+10％DMSO).②含有不同配比DMSO的细胞冻存液分组:E组(45％DMEM/F12+50％FBS+5％DMSO);F组(40％DMEM/F 12+50％FBS+10％DMSO);G组(35％DMEM/F12+50％FBS+1 5％DMSO);H组(30％DMEM/F 12+50％FBS+20％ DMSO).以相同方法冻存并复苏人iPSC,观察比较不同组细胞在复苏14d后重新形成典型干细胞集落的数量,并在相同诱导分化体系下,记录复苏人iPSC向神经元和胶质细胞分化的效率.结果:C和F组细胞复苏后形成典型干细胞集落的数量多于其他组(P＜0.05),A和B组细胞复苏后分化为神经元的效率略高于其他实验组.结论:以40％DMEM/F12+50％FBS+10％DMSO配比组合成的细胞冻存液作为人iPSC的冻存保护剂,可使人iPSC的冻存复苏效率最优并保持较好的生物学特性.
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