[1]嘉和生物药业有限公司,上海 201203
通过试验设计(DOE)方法和JMP软件分析快速优化重组CHO细胞在生物反应器中的培养工艺,保证抗体高表达量的同时降低五聚甘露糖(Man5)水平。以培养基CD-CIM1为基础培养基,在细胞培养过程中添加补料培养基流加培养,利用3 L小型生物反应器,对反应器pH值,溶氧(DO),温度(T)3个控制参数进行3因子2水平比较,以抗体表达量(Titer)、产物蛋白Man5水平为响应变量,应用JMP软件进行拟合模型最小二乘法分析,找出最优工艺参数。用优化的工艺参数进行验证,并且放大到50 L生物反应器中,先后培养两个批次,进一步验证优化结果。通过分析,参数T、pH值及3因素间两两交互作用对Titer均有显著影响,DO对Titer影响不显著;pH对Man5有显著影响,T、DO及3因素间两两交互作用对Man5的影响均不显著。结果预测,为获得高表达量及可接受范围(0%－10%)内的Man5水平,最优工艺参数为pH 7.10,DO 60%,T 34.5℃。用优化工艺在小型生物反应器内进行验证,收获时抗体表达量分别为1 152,901mg/L;Man5水平分别为8.60%,7.49%;两个批次的50 L生物反应器放大培养,抗体表达量分别为840,849mg/L,Man5水平分别为6.03%,9.45%,结果均符合预期。成功运用DOE方法快速高效的建立了降低Man5水平的细胞培养工艺,为后期放大提供依据。
(8.0+极速模式)