观察益气活血方对系统性硬皮病(SSc)患者成纤维细胞(fibroblasts,Fb)增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因转录的影响,以探讨此方治疗SSc的作用机理。①建立了来自SSc患者和正常对照者的Fb原代培养细胞各五株。比较了两种细胞基本的生物学特点,显示SSc组和对照组Fb的生长、增殖情况基本相似。②采用核酸原位杂交法测定培养的硬皮病和正常人Fb中COLlAl mRNA的表达。结果提示硬皮病组FbCOLlAl mRNA(光密度值905.09±20.36)表达较对照组(354.17±30.89)明显增高。硬皮病组和对照组Fb的COLlAl mRNA表达均存在异质性,硬皮病组COLlAl mRNA高表达的Fb数(27.33±4.63%)明显高于对照组(3.67%±1.20%),而对照组低COLlAlmRNA表达的Fb数(62.33%±3.53%)明显高于硬皮病组(14.33%±4.91%)。硬皮病组内各细胞株间,高、中、低胶原表达的细胞数并无明显差别。SScFbⅠ型胶原mRNA表达较对照组明显增多且存在异质性。③研究益气活血方对SSc患者Fb增殖和影响。采用MTT法分析药物对Fb增殖的影响。先以台盼蓝染色法结合直接镜检法确定了药物的大致ID50浓度,随后分别以10、20、40、80、160mg·ml~(-1)的浓度作用于细胞,并观测其作用后6天对细胞生长增殖的影响。结果显示益气活血方能显著抑制Fb增殖,浓度越高,作用越强。④采用RT-PCR方法分析了SSc组和正常组Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的差别,SSc组Ⅰ型前胶原mRNA表达约是对照组的2倍,Ⅲ型约是对照组的1.8倍。以5mg·ml~(-1)(ID50/10)浓度的益气活血方干预,作用于Fb24h后,能显著抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,Ⅰ型减少46%,Ⅲ型减少42%,对Ⅰ型前胶原基因转录抑制稍强。益气活血方能显著抑制Fb增殖,抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,这可能是其能够有效治疗SSc的原因之一。
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