目的:研究αA晶状体蛋白特定氨基酸位点磷酸化对人晶状体上皮细胞(HLEC)抗氧化及抗凋亡能力的影响。方法:实验研究.利用基因定点突变技术,将αA晶状体蛋白第45位、66位、122位丝氨酸分别突变为天冬氨酸以模拟磷酸化,导入pEGFP-C1质粒并经脂质体转染HLEC作为实验组(即S45D组、S66D组、S122D组),转染空质粒以及过表达野生型(WT)αA晶状体蛋白的HLEC分别为空白对照组和WT组.经H2O2诱导后,分别应用超氧化物阴离子荧光探针和Annexin V-PE/7AAD双染法检测各组细胞的活性氧水平及凋亡率.两组间参数的比较采用两样本均数比较的t检验或Wilcoxon秩和检验,多组间比较采用随机区组设计的方差分析或Kruskal-Wallis检验。结果:转染模拟磷酸化αA晶状体蛋白的3组细胞超氧化物阴离子平均荧光亮度分别为167.53±18.21,143.54±4.78和143.40±30.19,较空白组(274.42±3.71)显著下降(t=9.963,P=0.001;t=34.961,P<0.01;Z=1.993,P=0.046),与WT组(192.67±1.47)亦存在差异(Z=1.964,P=0.049;t=17.887,P<0.01;Z=1.964,P=0.049);H2O2诱导的细胞凋亡后,模拟αA晶状体蛋白磷酸化的细胞组早期凋亡率分别为15.08%±0.90%,16.59%±5.37%和15.36%±2.62%,较空白组(41.28%±2.70%;t=21.632,P<0.01;t=8.855,P<0.01;t=15.450,P<0.01)及WT组(31.40%±1.64%)显著下降(t=15.117,P<0.01;t=4.524,P=0.006;t=8.988,P=0.001).3组实验组间相比活性氧水平及早期凋亡率均无明显差异(F=1.08,P=0.407;x2=4.345,P=0.114)。结论:αA晶状体蛋白第45位、66位、122位丝氨酸位点模拟磷酸化能增强HLEC抗氧化能力及抗凋亡活性。
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