目的:CCL2(MCP—1)、CCL5(RANTES)等CC 族趋化因子与乳腺癌的生长、侵袭和转移密切相关,趋化因子诱饵受体可能参与其调控,其中以ELR阳性CXC族和部分CC族趋化因子为靶分子的Duffy antigen receptor for chemokines(DARC)已被证实是一种司负性调节的趋化因子诱饵受体。D6是一种只结合并清除CC族趋化因子的诱饵受体．其配基包括CCL2—5、7、8、11-14、17、22等共 12种。令人感兴趣的是,这些趋化因子中的多数受DARC 与D6的双重调节,而CCL4(MIP—1)、CCL8(MCP-2)、 CCL12(MCP-4)和CCL22(MDC)则只受D6的调节。我们推测乳腺癌中的趋化因子网络可能也在一定程度上受癌细胞自身产生的D6的影响,为此本文首先调查了D6在乳腺癌细胞中的组成性表达以及细胞因子诱导后D6表达的改变。方法:共10种人乳腺癌细胞系分别按美国典型培养物保藏中心(ATCC)等推荐的培养基进行培养,即MCF-7 用MEM培养基,MDA-MB-231、MDA—MB-435、MDA— MB-435H(本室建立的肺高转移性细胞系)和MDA—MB- 468用Leibovitz’s L-15培养基,SK—BR-3用McCoy’ s 5a培养基,T47D、SK—BR-3、BCaP-37、ZR-75-1、 ZR-75-30和Bcap-37用RPMI 1640培养基加10％FCS。提取对数生长期培养细胞和手术切除的人正常脾组织的总 RNA,用RT-PCR法分析D6的GAPDH相对性基因表达。在MCF-7、MDA-MB-231、MDA—MB-435和MDA- MB-435H细胞,同时进行了以SYBR Green I为荧光染料的实时荧光定量PCR分析。此外,分别以重组人IL-1 β (2ng／ml,24h)、TNF-α(20ng／ml,24h)和IFN-γ(20ng／ ml,24h)刺激MDA—MB-231细胞,通过实时PCR分析D6 基因表达的改变。结果:D6 mRNA在所有10个人乳腺癌细胞系及作为阳性对照的人正常脾组织中均可检出,表达水平因细胞而异,其中MCF-7、ZR-75-1和SK-BR-3细胞的表达量较高。此外,以MDA-MB-231细胞为研究对象的细胞因子诱导实验结果显示,IL-1 β促进D6的基因表达,而TNF-α和IFN-γ抑制D6的基因表达。结论:本研究首次证实D6 mRNA在来源于不同患者、生物学特性各异的多种人乳腺癌细胞系中均呈组成性表达,提示CC族趋化因子的诱饵受体D6也可能参与乳腺癌中趋化因子的调控,从而影响乳腺癌的发生、发展过程。乳腺癌中D6的基因表达至少部分地受IL-1β等细胞因子的调节,其意义尚不清楚。对D6的进一步研究将有助于阐明其在乳腺癌等肿瘤中的作用,为肿瘤治疗提供新的思路。
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