[1]复旦大学附属中山医院肝癌研究所,上海200032
目的探讨短发夹（sh）RNA芳香烃受体核易位蛋白（ARNT）2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响。方法以ARNT2为目的基因，化学合成4条干扰RNA，与经MluⅠ和ClaⅠ酶切后的pLVTHM载体连接过夜，筛选并鉴定阳性克隆。利用脂质体2000将ShRNA—ARNT2i，pCMV—dR8．74，pMD2G共转染293T细胞，获得shRNA—ARNT2i慢病毒颗粒，进一步感染HCCLM6靶细胞，并分为转染shRNAARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组。用荧光实时定量PCR和Westernblot检测ARNT2基因的干扰效率。应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响。用SPSS16．0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析，其中多组资料两两比较采用LSD法。结果荧光实时定量PCR检测转染shRNAARNT2i组，未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2mRNA相对表达值分别为0．154±0．024、0．860±0．145、1．004±0．009，F=113．14，P〈0．01，差异有统计学意义；Westernblot显示转染stLRNA—ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16．45±1．6，转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为44．56±2．07，两组比较，t=18．58，P〈0．01，差异有统计学意义；转染shRNA—ARNT2i组细胞在划痕48h后基本愈合，而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见；转染shRNAARNT2i组穿膜细胞数为（13．25±1．04）个，而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为（6．50±2．56）个、（6．75±2．05）个，F=29．645，P〈0．01，差异有统计学意义。结论shRNA—ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达，促进HCCLM6细胞的运动和侵袭。
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