第一部分慢性束缚浸水应激大鼠认知功能改变及海马区NCAM表达改变 目的 探索慢性应激对大鼠认知功能及其海马区神经细胞粘附分子表达的影响。 方法 1.建立慢性应激动物模型 选取成年Sprague dawley(SD)雄性大鼠60只,体重范围在180—200g。随机选取40只编号后作为应激组,通过每日束缚浸水1小时的方式慢性应激3周。剩余20只大鼠作为对照组自由摄食进水。 2.Morris水迷宫试验测定大鼠认知功能 应激3周完成后,选取应激组及对照组大鼠各10只通过morris水迷宫试验进行所有大鼠认知记忆功能测定。通过记录逃避潜伏期评价大鼠学习认知功能。 3.海马区神经细胞粘附分子测定 上述20只大鼠通过左心室多聚甲醛灌注后取大脑标本,选取海马区冰冻切片后,DAB免疫组化染色,采用LeicaLD-2生物光学显微镜相连的LeicaDFC-300图象分析系统进行NCAM定量分析。 4.统计学方法使用SPSS软件进行分析,数据用均数土标准差表示,采用t检验。 结果 1).大鼠因溺水、麻醉等意外死亡共4只,均为应激组大鼠。2).20只应激组及对照组逃避潜伏期:应激组25.2±3.6s,对照组37.9±5.1s(p＜0.05,t=-4.76)。3).应激组海马CA3区NCAM的表达25.2±3.6低于对照组37.9±5.1(P＜0.05,t=6.09)。 结论 慢性应激对于大鼠的认知功能具有损害作用,慢性应激大鼠的海马区NCAM表达与正常对照大鼠相比呈下降趋势,表明慢性应激会影响大鼠海马区NCAM表达,慢性束缚浸水可能通过某种机制抑制了大鼠NCAM表达从而损害了大鼠的认知功能。 第二部分氟西汀干预对于慢性应激大鼠认知功能及海马NCAM的影响 目的 探索氟西汀腹腔注射干预治疗对于慢性应激大鼠的认知功能及其海马区NCAM表达的影响。 方法 1.动物分组 将第一部分应激组26只剩余大鼠随机分为氟西汀干预组及生理盐水应激组,每组各13只。另对照组10只剩余大鼠自由摄食进水。 2.3周氟西汀干预 氟西汀干预组给予剂量为10mg/kg的氟西汀腹腔注射干预,生理盐水组给予等量的生理盐水腹腔注射对照,干预时间为3周,同时2组仍然保持每日1小时的束缚浸水应激。另外10只剩余对照组也给予同等量生理盐水腹腔注射。 3.Morris水迷宫试验测定大鼠认知功能 干预3周完成后,三组大鼠均通过morris水迷宫试验进行所有大鼠认知记忆功能测定。通过记录逃避潜伏期评价大鼠学习认知功能; 4.海马区神经细胞粘附分子测定 完成水迷宫实验后大鼠通过左心室多聚甲醛灌注后取大脑标本,冰冻切片后,选取海马进行DAB免疫组化染色,采用LeicaLD-2生物光学显微镜相连的LeicaDFC-300图象分析系统进行NCAM定量分析。 5.统计学方法使用SPSS11.0软件进行分析,数据用均数±标准差表示,采用t检验及ANOVA检验SNK法进行两两比较。 结果 1).氟西汀干预后水迷宫试验结果,逃避潜伏期:对照组(n=10)5.35±2.0s;氟西丁+应激组(n=13)18.01±6.3s;应激组+生理盐水(n=13)54.18±23.08s;三组之间均有统计学差异。2).氟西汀干预后NCAM测定结果为氟西汀干预组一只大鼠大脑标本遗失。应激组与干预组大鼠海马CA3区NCAM的表达均低于对照组(P＜0.05)应激组大鼠的海马CA3区NCAM的表达低于干预组,但差异无显著性。对照组(n=10)38.6±2.57干预组(n=12)22.0±2.84应激组(n=13)21.2±2.40。 结论 SSRIs类药物干预治疗三周后可以改善慢性应激引起的认知功能损害现象,经干预后大鼠的学习记忆功能有改善,SSRIs类药物干预三周后慢性应激大鼠海马区NCAM表达下降无明显改善。
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