第一部分SNAI2与卵巢癌临床病理因素的相关性及其与预后的关系目的：探讨SNAI2与卵巢癌临床病理因素的相关性及其与预后的关系方法：从TCGA数据库提取208例浆液性卵巢癌患者的临床资料和SNAI2的表达数据,卡法检验分析SNAI2的表达与年龄、组织学分级、FIGO分期和淋巴管浸润的相关性；同时提取TCGA数据库208例浆液性卵巢癌患者和GSE26712数据集185例浆液性卵巢癌患者的生存资料和SNAI2的表达数据,Log-rank分析分析SNAI2的表达与卵巢癌患者总生存期的相关性,Kaplan-Meier法绘制生存曲线图。结果：SNAI2的表达和患者年龄及卵巢癌组织学分级无明显相关性；SNAI2在FIGO III-IV期卵巢癌组织中的表达明显高于FIGO I-II期卵巢癌组织中的表达,且SNAI2高表达的卵巢癌患者更容易发生淋巴管浸润。在TCGA数据集中,SNAI2高表达的卵巢癌患者总生存期明显低于SNAI2氐表达的卵巢癌患者(P=0.044,HR=0.65)。这一结果在GSE26712数据集中得到进一步确认,即SNAI2的表达与卵巢癌患者的总生存期呈明显负相关(P=0.0017,HR=0.56)结论：SNAI2高表达是卵巢癌患者预后的一个不良因素。第二部分SNAI2相关ceRNA的筛选和鉴定目的：SNAI2相关ceRNA的筛选和鉴定方法：生物信息学预测并结合文献筛选SNAI2相关ceRNA;在OVCA433和SKOV-3细胞中过表达SNAI2-3"UTR, Real-time PCR和Western Blot检测干扰SNAI2-3"UTR前后候选基因表达水平的改变；选取受SNAI2-3"UTR正向调控的基因,在TCGA和GEO数据库检测SNAI2和候选ceRNA在卵巢癌组织中的表达的相关性；Real-time PCR检测能同时靶向SNAI2和MARCKS的miR-200c,miR-204, miR-211, miR-218和miR-429在OVCA433和SKOV-3细胞中的相对表达量,选取表达量相对较高的miRNA作为候选miRNA。双荧光素酶报告基因实验分析候选miRNA对MARCKS的抑制作用,以及SNAI2-3"UTR是否可以通过竞争性结合候选miRNA诱导MARCKS的表达。结果：生物信息学预测并结合文献筛选出10个SNAI2相关ceRNA,包括CDH2, FN1, KLF8, MARCKS, MMP2, PPARG, TWIST1, VIM, ZEB1和ZEB2。在OVCA433和SKOV-3细胞中过表达SNAI2-3"UTR能显著促进MARCKS的mRNA和蛋白表达水平。相关性分析进一步发现,SNAI2和MARCKS在卵巢癌组织中的表达呈明显正相关。且在SNAI2低表达的卵巢癌组织中,MARCKS也呈低表达,而在SNAI2高表达的卵巢癌组织中,MARCKS也呈高表达。miRNA表达谱分析表明,miR-218, miR-200c和miR-429在OVCA433和SKOV-3细胞中的表达量相对较高,miR-204表达相对较低,miR-211基本不表达。我们选取miR-218, miR-200c和miR-429作为候选miRNA。双荧光素酶报告基因实验表明：①miR-218和miR-200c通过结合MARCKS-3"UTR种子区结合序列,显著抑制荧光素酶的相对活性,而miR-429对荧光素酶抑制作用相对较弱；②SNAI2-3"UTR可以通过竞争性结合miR-218和miR-200c,抑制miR-218和miR-200c的活性,逆转其对荧光素酶的抑制作用。结论：SNAI2作为ceRNA诱导的MARCKS表达增强至少部分是通过抑制miR-218和miR-200c活性介导的。第三部分MARCKS在卵巢癌EMT中的功能分析目的：解析MARCKS在卵巢癌EMT中的作用方法：用慢病毒载体介导的shRNA转染OVCA433和SKOV-3细胞,构建MARCKS稳定低表达的稳转细胞株,Real-time PCR和Western Blot检测MARCKS降表达效率。罗氏实时细胞分析仪RTCA-CIM-Plate检测MARCKS降表达后,卵巢癌OVCA433和SKOV-3细胞浸润和迁移能力的改变；同时在显微镜下观测干扰MARCKS表达前后,细胞形态学的改变。结果：在OVCA433和SKOV-3细胞中转染MARCKS-shRNA后,MARCKS的mRNA和蛋白水平均明显下调。功能学研究表明,下调MARCKS的表达能显著抑制卵巢癌细胞的浸润和迁移能力,同时细胞的形态更趋向于上皮细胞。结论：SNAI2促进卵巢癌细胞发生EMT的功能至少部分是通过ceRNA作用模式,诱导MARCKS表达介导。第四部分SNAI2-3"UTR在卵巢癌侵袭转移中的作用研究目的：探讨SNAI2-3"UTR在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法：用慢病毒载体在OVCA433和SKOV-3细胞中过表达SNAI2-3"UTR,罗氏实时细胞分析仪RTCA-CIM-Plate检测干扰SNAI2-3"UTR前后卵巢癌细胞浸润和迁移能力的改变。结果：在OVCA433和SKOV-3细胞中过表达SNAI2-3"UTR后,细胞的浸润能力明显得到增强,其迁移能力则无明显改变。结论：SNAI2-3"UTR能显著促进卵巢癌细胞的浸润能力。
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