[1]200080,上海,上海交通大学附属第一人民医院眼科
[2]200031,上海,复旦大学附属眼耳鼻喉科医院
[3]200032,上海市计划生育研究所
目的研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA.方法从新鲜和保存1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA,RT-PCR一步法扩增.PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切,将酶切产物通过T4DNA连接酶连接,重组质粒.将重组质粒导入感受态的DH5α大肠杆菌中,筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定,选取阳性克隆测序.结果RT-PCR产物电泳,可见单一清晰的条带,约410bp.重组质粒酶切后见二条带,小带约410bp,与插入片段一致.测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同.结论新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA.