第一章靶向抑制GRP75增强肝癌细胞对HSP90的抑制剂17-AAG的敏感性 肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在全世界范围内处于第二位,每年我国死于肝癌的人数高达11万之多。早期肝癌的患者可通过外科切除及肝移植等手段进行治疗,80%的晚期肝癌病人依赖于化疗,但是由于其有限的治疗效果及严重的不良反应,因此探讨不同药物治疗肝癌对于肝癌患者具有重要的临床意义。 大量的研究发现,癌症患者的组织中热休克蛋白(Heat Shock Proteins, HSPs)的含量高于正常组织,一些热休克蛋白被认为可以作为癌症发生发展的标志蛋白,作为临床诊断的指标。因此研究热休克蛋白与癌症的发生发展对其诊断、治疗、预后均有一定的临床意义。我们利用GEO公共数据库中的有关肝癌的芯片数据、和利用免疫组化标记肝癌组织芯片,对HSP90及GRP75的表达进行数据分析并统计,得出肝癌的发生发展与这两个热休克蛋白有着一定相关性。结果显示肝癌组织中GRP75与HSP90的表达量增高,这个结果在细胞水平上得到了进一步的验证；且肝癌的临床分期越高,组织内HSP90及GRP75的表达量越多,。 为了证实GRP75的抑制剂MKT-077和HSP90的抑制剂17-AAG对肝癌是否具有协同作用,我们选取三株肝癌细胞系Bel-7402、HuH7、Hep3B(不表达p53),分为对照组、MKT-077单用药组、17-AAG单用药组、MKT-077+17-AAG联合用药组。利用CCK-8(Cell Counting Kit-8).流式、免疫荧光染色分别检测细胞的活力、凋亡、p53的亚细胞定位情况,利用实时定量PCR检测各药物处理组的p53的靶基因的mRNA水平。构建Bel-7402细胞的皮下瘤模型,腹腔注射MKT-077或17-AAG、MKT-077+17-AAG,检测皮下瘤的生长情况,及检测肿瘤细胞中p53的分布。研究结果发现,17-AAG的作用下调了Akt及其磷酸化水平,但是上调了GRP75与p53的表达。此外,17-AAG还促进了GRP75与p53的结合作用,使得增加的p53滞留在细胞质中。MKT-077的加入阻断了GRP75与p53之间的结合作用,从而使更多的p53入核,诱导其与凋亡相关的靶基因p21、PUMA的表达。此外,共同抑制HSP90与GRP75能够有效地抑制皮下瘤的生长。因此,联用HSP90及GRP75的抑制剂可作为临床治疗肝癌的有效方案之一。 第二章GRP75在辐射过程中对PC12细胞的保护作用的研究 之前的研究中发现,在细胞受到低剂量辐射的条件下,GRP75的mRNA水平也增加。为了探讨GRP75保护辐射损伤下的细胞的作用,我们构建了GRP75过表达的PC12细胞,以野生型细胞为对照,检测相同剂量辐射下各细胞的增殖率、增殖相关蛋白topoisomerase Ⅱα (Topo Ⅱα)。研究结果表明在细胞受到低剂量辐射后,细胞的增殖率降低；GRP75受辐射应激上调,细胞内Topo Ⅱα表达下降。GRP75过表达的细胞在同样辐射剂量下,细胞增殖率有了一定的增加,且Topo Ⅱα的表达未见下调。这些结果说明,过表达GRP75有稳定接受辐射细胞中Topo Ⅱα表达水平的作用。 丹酚酸B和虫草多糖处理后的细胞在辐射作用下,细胞的增殖率未见降低,GRP75表达量上调,且Topo Ⅱα表达量未见下降且有上调趋势,但是仅有丹酚酸B抑制了辐射作用下细胞内活性氧的生成。由此可见,GRP75在辐射损伤下可通过抑制活性氧的生成,稳定Topo Ⅱα的表达从而对细胞具有保护作用。
收起
(8.0+极速模式)