癌痛即恶性肿瘤引起的疼痛,是临床上常见的慢性病理性疼痛之一,严重影响了患者的生活质量。据统计资料表明,肿瘤患者中约有30%-50%伴有轻到中度的疼痛,而在肿瘤晚期或转移性肿瘤患者中,约有75-95%的患者因伴有严重的疼痛而需要接受治疗。如何缓解癌痛成为提高临床患者生存质量的重要课题。吗啡作为阿片类镇痛药的经典代表,对急、慢性疼痛包括癌痛的治疗有非常好的疗效。目前,医学界对于癌痛的治疗强调及早、足量使用吗啡,且不限制吗啡使用量的上限。世界卫生组织也把一个国家的吗啡消耗量作为衡量该国疼痛控制水平的标志。因此,吗啡仍然是治疗癌痛的首要选择。吗啡通过作用于中枢阿片受体,发挥其强大的镇痛作用,有效缓解了癌症患者疼痛,但是吗啡具有成瘾、耐受和其他不良反应等缺点,极大地限制了其临床价值。吗啡用药不当,不仅造成镇痛作用下降,更严重的还会导致痛觉过敏、痛觉异常等现象。临床研究表明,长期反复使用吗啡会产生吗啡耐受(morphine tolerance,MT),表现为吗啡反复使用后导致机体对药物的反应性下降,需要加大剂量才能产生既定的药理效应。吗啡耐受已成为临床上治疗慢性疼痛的严重障碍。以往对于吗啡耐受的研究大多是基于正常动物吗啡耐受的模型,但是这种缺少病理性疼痛的动物模型,与临床状况并不相符。近年来基于病理性疼痛模型吗啡耐受机制的研究受到人们越来越多的重视,但是关于癌痛模型上吗啡耐受的报道仍很少。因此,观察癌痛模型上是否存在吗啡耐受是本课题研究内容之一。吗啡耐受和病理性疼痛存在很多相似。首先,行为上都可以出现痛觉过敏和痛觉超敏。前者表现为对伤害性刺激的敏感性明显增强,后者是在生理状态下原本不能引起痛觉的刺激(如轻触)也能够引起疼痛；其次,神经系统出现可塑性变化,主要存在于脊髓背角浅层。研究证实,在吗啡耐受模型上,脊髓胶质细胞显著增生激活；抑制胶质细胞的活化,则可以延缓吗啡耐受的进程,这说明胶质细胞参与了吗啡耐受。而胶质细胞在慢性痛的产生和维持过程中发挥了非常重要的作用：一方面,胶质细胞在主要的痛觉传递物质谷氨酸的代谢、摄取、合成、清除中起重要作用；另一方面,胶质细胞释放的炎性细胞因子如白细胞介素lbeta(Interleukin-lbeta,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子alpha (Tumor Necrosis Factor alpha,TNF-α)等是引起痛觉传递神经元敏化的主要因素,促进中枢敏化形成。以往研究表明,脊髓胶质细胞及炎性细胞因子参与了癌痛的作用机制；那么,在癌痛情况下的吗啡耐受是否也与脊髓小胶质细胞及炎性细胞因子有关呢?这是本文关注的一个问题之一。米诺环素,是一种半合成的第2代四环素衍生物,它可以通过血脑屏障到达中枢神经系统(Central Nervous System,CNS),发挥神经保护作用。作为小胶质细胞选择性的抑制剂,米诺环素可以抑制小胶质细胞的激活,下调炎性细胞因子的表达。有文献报道,在正常以及神经痛小鼠模型上,长期使用吗啡后诱导产生了吗啡耐受；鞘内给予米诺环素可以抑制小胶质细胞的激活,从而减轻了吗啡耐受。那么,在骨癌痛过程中,米诺环素是否也可以延缓吗啡耐受的进程?其作用又是否与小胶质细胞有关?这是本课题研究的又一内容。综上所述,本课题拟开展开下列研究：1、建立并评价胫骨癌痛大鼠吗啡耐受模型；2、观察米诺环素对吗啡耐受的影响；3、运用Real Time-PCR技术检测脊髓炎性细胞因子TL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达变化。结果显示：1、在胫骨癌痛大鼠模型上,采用皮下注射(Subcutaneous Injection,s.c.)吗啡10mg/kg,2次／天,连续5天,选择在骨癌痛的早期(造模后第5-9天)和晚期(造模后第14-18天)产生了吗啡耐受,表现为大鼠的机械痛和热痛随着吗啡给药时间的延长显著降低,提示吗啡的镇痛作用减弱；在胫骨癌痛造模后的第9天,单次吗啡组对热痛的镇痛效应即最大可能效应的百分数(percentage of maximal possible effect,MPE%)显著高于多次吗啡组,进一步提示反复多次使用吗啡可以产生吗啡耐受。2、在胫骨癌痛大鼠造模后的第5到9天,与10mg/kg吗啡组相比较,50mg/kg米诺环素(Perfusion Orally,p.o.)+吗啡组、100mg/kg米诺环素+吗啡组、200mg/kg米诺环素+吗啡组合用组对热痛的镇痛效应均有增加的趋势；并且在造模后的第5天和第7天,200mg/kg米诺环素+吗啡合用与吗啡组比较,差异显著并具有统计学意义,提示米诺环素加强了吗啡的镇痛作用,延缓了吗啡耐受的进程。3、Real Time-PCR结果显示,在胫骨癌痛造模后的第10天,与生理盐水(Normal Saline,NS)组相比较,10mg/kg吗啡组脊髓背角炎性细胞因子IL-1 β、IL-6 mRNA(messager RNA, mRNA)的表达有上调趋势,但无统计学意义,提示脊髓IL-1β、IL-6表达上调可能是胫骨癌痛大鼠吗啡耐受的机制之一；与10mg/kg吗啡组相比较,200mg/kg米诺环素+10mg/kg吗啡组脊髓背角炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA显著下降,提示米诺环素可能通过抑制脊髓背角炎性因子的表达,从而延缓了胫骨癌痛大鼠吗啡耐受的进程。综上所述,本研究提示：1、在胫骨癌痛大鼠模型上,无论是在骨癌痛的早期还是在后期,反复多次使用吗啡均可产生吗啡耐受；2、脊髓炎性细胞因子IL-1β、IL-6表达上调可能是胫骨癌痛大鼠吗啡耐受的机制之一。3、外周给予小胶质细胞选择性抑制剂米诺环素,可以延缓胫骨癌痛大鼠上吗啡耐受的进程,并且这一作用可能是与脊髓背角小胶质细胞的激活受到抑制后,细胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达下调有关。
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