第一部分异氟醚麻醉损伤新生小鼠海马并引起学习记忆障碍目的：探讨异氟醚对新生小鼠海马的损伤及学习记忆能力的影响。方法：健康新生7日龄C57BL/6小鼠,随机分为两组：异氟醚组和对照组。异氟醚组：出生第7日起开始进行浓度为1.5%的异氟醚麻醉,麻醉三天(出生第7、8、9日),每天2小时,吸入氧浓度100%；对照组在相应的时间仅吸入100%氧气,麻醉过程中保温保湿。两组在第9日麻醉后立即处死,解剖取脑,分离海马,行Western Blot检测海马组织凋亡标志蛋白Caspase-3; TUNEL染色计数海马区凋亡细胞；Morris水迷宫实验检测以后的学习记忆能力。结果：与对照组相比,异氟醚组小鼠海马组织Caspase-3表达显著增加,TUNEL染色海马区阳性细胞数明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05)；水迷宫实验结果,与对照组相比,异氟醚组小鼠逃避潜伏期明显延长,平台穿越次数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：异氟醚麻醉新生小鼠可致其海马区神经细胞凋亡,引起海马损伤,影响大脑发育,进而引起其以后的学习记忆能力减退。第二部分异氟醚通过激活FAS信号途径损伤新生小鼠海马并引起学习记忆障碍目的：探讨异氟醚可通过激活FAS信号途径损伤新生小鼠海马损伤并引起学习记忆能力障碍。方法：健康新生7日龄C57BL/6小鼠,随机分为两组,分别为异氟醚组和空白对照组。两组麻醉方法同第一部分。在三天麻醉后,脱颈处死,取海马,行Western Blot检测FAS蛋白(CD95)和FAS配体蛋白(FASligand,FASL)。另取FAS或FASL基因敲除的B6. MRL-Faslpr/Jnju小鼠和B6Smn. C3-Faslgld/Jnju小鼠作为FAS基因缺陷组和FASL基因缺陷组,对两种小鼠分别做吸入异氟醚和单纯氧气的处理,用第一部分中相同方法麻醉和单纯吸氧三天。用Western Blot方法检测四组小鼠(FAS基因敲除异氟醚组、FAS基因敲除纯氧组、FASL基因敲除异氟醚组和FASL基因敲除纯氧组)的Caspase-3的表达。用TUNEL染色法观察FAS基因敲除异氟醚组和FASL基因敲除异氟醚组小鼠海马区阳性细胞数。用水迷宫实验检测FAS基因敲除异氟醚组和FASL基因敲除异氟醚组小鼠的学习记忆能力。将三个实验的结果与第一部分中相应健康异氟醚组和对照组的结果合并、对比观察并统计分析。结果：异氟醚组麻醉的健康新生小鼠其FAS蛋白和FASL蛋白均较空白对照组表达显著增加,差异有统计学意义(p<0.05)。异氟醚健康组Caspase-3表达较FAS缺陷异氟醚组和FASL缺陷异氟醚组显著增加,差异有统计学意义(p<0.05)；而对照组分别与FAS缺陷纯氧组、FAS缺陷异氟醚组、FASL缺陷纯氧组和FASL缺陷异氟醚组相比,Caspase-3表达差异均无统计学意义；Two-way ANOVA分析可得异氟醚麻醉与FAS或FASL基因敲除在Caspase-3的表达影响上有联系,FAS或FASL基因敲除可能减弱了异氟醚所引起的Caspase-3表达的增加。异氟醚健康组TUNEL染色阳性细胞数较FAS缺陷异氟醚组和FASL缺陷异氟醚组均显著增加；而对照组与FAS缺陷异氟醚组和FASL缺陷异氟醚组的TUNEL阳性细胞数相比,差异无统计学意义。异氟醚健康组的逃避潜伏期较FAS缺陷异氟醚组和FASL缺陷异氟醚组明显延长,平台穿越次数明显减少,差异有统计学意义(p<0.05)；而对照组与该两组小鼠的差异均无统计学意义。结论：异氟醚可通过激活FASL-FAS信号途径引起健康新生小鼠海马区细胞的凋亡,从而损伤海马并引起其以后的学习记忆能力下降。对于切断FASL-FAS信号通路的小鼠则可减轻该种损伤,学习记忆能力也有明显改善。从而证明FAS通路是异氟醚损伤新生小鼠海马的机制之一。
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