HIV-1的特点之一是具有多个调节基因,这些基因可编码相应的调控蛋白,如Nef、Tat、Rev、Vif,Vpr、Vpx、Vpu等,它们在RNA转录、转录后加工、蛋白质翻译直到病毒颗粒从细胞膜释放的过程中发挥重要的调节作用。<br> HIV-1Vif蛋白,即人类免疫缺陷病毒的病毒感染性因子由vif基因编码,是一个23kDa的病毒附属蛋白,为病毒在特定类型细胞中复制所必需[1],[2]。Vif的主要功能是与细胞胞嘧啶脱氨酶家族(APOBEC3)相互作用[3,4],通过降解宿主蛋白APOBEC3G/F,使病毒在准许细胞中顺利复制。此外Vif蛋白还可与Pr55Gag、病毒RNA(gRNA)相互作用,参与病毒的装配。国外已有研究关于vif序列特征以及其与疾病进展的关系,但国内尚缺乏相关资料。<br> 本实验使用PCR等分子生物学方法,对2008年至2009年收集的我国上海及山西两地HIV-1感染者血浆病毒基因中vif基因进行扩增、序列测定和分析,研究其变异特征,评价Vif的重要功能区的保守程度;探讨两地感染者HIV-1vif基因变化与患者的疾病状态间的相关性,为深入了解我国HIV-1的致病机理提供依据。<br> 方法：<br> 收集我国上海、山西地区38名HIV-1感染者的流行病学资料、临床资料及血浆标本。使用TRIzol和QIAGENMiniViralkit从血浆标本中抽提得到病毒RNA,以vif基因区特异性下游引物反转录得到cDNA,后进行巢式PCR。1.2％琼脂糖凝胶电泳检测目的片段。与分子量Marker比对无误后,纯化回收产物并送测序。使用CLUSTALW程序进行序列排列比对。检索HIVDatabase得到78条HIV-1Vif参考株序列,MEGA4.0程序生成系统进化树,初步判定亚型,计算基因系统发育离散度。分析Vif重要功能结构域氨基酸的变化。使用VESPA软件得到特征性氨基酸序列。STATA软件分析特殊位点与疾病状态间的统计学意义。<br> 结果：<br> 共对17份上海标本(包含1例来自河南的感染者,在上海治疗)和21例山西标本进行扩增。38例血浆标本扩增后得到31例vif基因,7例扩增结果为阴性,其中5例属于长期不进展者,2例为AIDS。根据构建的系统进化树的结果,上海地区11例感染者属于CRF01_AE亚型,其余20例感染者属于B亚型。两个亚型与相应的国际参考株间的基因距离均小于与其他亚型间的基因距离。Vif蛋白重要功能结构域N-端色氨酸富集区、锌指结构H108-X5-C114-X18-C133-X5-H139、144SLQYLA149qψψψψ、161PPLP164及部分位点均为保守区,而部分与APOBEC3G相互作用的位点、磷酸化位点等,在TP组和LTNP组均存在变化。通过与不包括中国毒株在内的世界五大洲的相同亚型的代表序列比对,发现11例CRF01_AE序列有3个特征性氨基酸位点(aa94,aa180,aa185),20例B'亚型序列有6个特征性氨基酸位点(aa6,aa90,aa98,aa135,aa157,aa185)。Vif132位的S/R,159位的R/I与患者疾病状态间存在统计学差异。<br> 结论：<br> 1.上海地区性传播感染者中CRF01AE亚型常见。山西闻喜地区非法鲜血感染者以B'亚型为主。可能可以利用vif基因可以做粗略分型;<br> 2.Vif132位的S/R可能与患者的CD4+T水平高低有关联;<br> 3.Vif蛋白的重要功能序列为保守区;<br> 4.AIDS与LTNP两组的Vif氨基酸序列中的磷酸化位点、结合APOBEC3G的位点都有变化。其变化是否影响Vif功能及疾病进展有待于进一步验证;<br> 5.中国Vif序列与其他国家分离得到的Vif序列相比存垄特征性氨基酸差异。
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