[1]复旦大学附属儿科医院肾脏科,上海 201102
[2]复旦大学附属儿科医院风湿科,上海 201102
[3]复旦大学附属儿科医院中医科,上海 201102
目的:探讨血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)对足细胞骨架重排的影响,及ANGPTL3引起的足细胞骨架重排是否主要通过整合素B3信号通路。方法:体外培养永生化小鼠足细胞,分为6组:正常足细胞(WT)组;空质粒转染(MOCK)组;MOCK+阿霉素(ADR)组;ANGPTL3质粒转染(ANGPTL3-cDNA)组;敲低ANGPTL3表达(miRNA)组;miRNA+ADR组。用鬼笔环肽抗F肌动蛋白(F-actin)单克隆抗体行足细胞骨架蛋白F-actin染色,激光共聚焦显微镜下观察骨架重排和F-actin蛋白相对表达量变化。整合素B3单克隆抗体(CD61)特异性封闭足细胞表面整合素p3,观察足细胞骨架重排改变。Western印迹法检测足细胞整合素p3信号通路因子黏着斑激酶(FAK)和p-FAK表达改变。结果:(1)激光共聚焦显微镜下观察结果显示,正常足细胞骨架肌纤维排列有序,荧光显示清晰;ADR组足细胞突触结构消失,骨架排列紊乱,荧光明显模糊减弱,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。与MOCK组比较,miRNA组细胞骨架结构及F-actin相对表达量的差异无统计学意义;ANGPTL3-cDNA组细胞骨架明显重排、F-aetin表达量下降(P<0.01)。与ADR组比较,ADR+miRNA组细胞骨架重排的细胞比例和F-actin荧光强度均明显得到改善(均P<0.01)。(2)CD61封闭足细胞整合素B3后,再给予ANGPTL3质粒转染,足细胞骨架重排比率较未封闭组明显改善(P<0.01)。(3)高表达ANGPTL3组足细胞p-FAK的表达量较MOCK组明显升高(P<0.01)。结论:ANGPTL3是阿霉素诱导的足细胞骨架重排的关键分子,整合素B3是ANGPTL3诱导足细胞损伤的主要信号通路。
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