目的本实验通过两种不同毒力结核杆菌的纯蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞(THP-1)凋亡的差异及其与Toll样受体-2(TLR-2)相关性进行初步研究。方法:分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白(H37Rv-PPD)和低毒力结核杆菌衍生蛋白(BCG-PPD)在3h、8h、15h及24h刺激分化成熟的THP-1细胞;应用Hocost染色染色法,荧光镜下观察细胞凋亡及坏死情况。通过流式细胞仪检测细胞annexin V蛋白以判定凋亡情况、TLR-2表达情况;加入TLR-2阻断剂后,用上述方法,流式测定细胞表面TLR-2的阻断效果及凋亡情况。结果:1)由Hochest染色法可见,BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状。2)BCG-PPD刺激下凋亡率随时间升高,在24小时点凋亡比例高达30.2%,而同时间点测TLR-2的比例为8.84%;应用TLR-2阻断剂后,每个时间点TLR-2表达比例均在3%以下(与对照比例相当),对应时间点凋亡比例均下降,24小时时凋亡比例仅为10.5%。3)在高毒力菌株的外分泌蛋白(H37Rv-PPD)可引起Toll样受体2(TLR-2)高表达,24小时TLR-2表达率达17.2%,该点凋亡率仅为7.72%;TLR-2阻断后,TLR-2表达率在对照波动范围内,但凋亡率与TLR-2未阻断前比例相比,变化不大。结论:1)BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡,且这种凋亡与TLR-2有一定的相关性;而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死。2)H37Rv-PPD激活了TLR-2的高表达却不能诱发THP-1凋亡,而诱发THP-1发生坏死,可能与TLR-2的双向作用有关。
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