[目的] 本研究旨在通过观察黄芩苷(Baicalin)对盲肠结扎和穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)诱导的脓毒症大鼠血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(Neutrophil gelatinase associated lipocalin, NGAL)浓度、血清肌酐浓度,肾组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平、肾组织核因子κB (nuclear factor-κB, NF-κB)水平,肾组织细胞凋亡率、肾组织内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3信使核糖核酸(casepase-3mRNA)相对含量以及肾组织病理变化的影响,探讨黄芩苷对脓毒症大鼠的肾脏保护作用及其可能的机制。 [方法] 清洁级雄性Sprague Dawley (SD)大鼠采用盲肠结扎和穿刺术制备大鼠脓毒症模型。实验大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩苷干预组(每组24只)假手术组(Sham组)：行剖腹术,术后立即腹腔注射0.9%氯化钠溶液2mL；模型组(CLP组)：行盲肠结扎和穿刺术,术后立即腹腔注射0.9%氯化钠溶液2mL;黄芩苷干预组(Baicalin+CLP组)：行盲肠结扎穿刺术造模后,黄芩苷按照120mg/kg剂量,用0.9%氯化钠溶液稀释至2mL,行腹腔注射。每组大鼠在CLP术后0h、3h、6h、24h分别采血标本和右肾组织标本。血清NGAL浓度由酶联免疫法(enzyme-linked immuno sorbent, ELISA)测得。血清肌酐浓度由自动生化分析仪测得。肾组织TNF-α和NF-κB水平由免疫组织化学法测得。肾组织细胞凋亡率由原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling, Tunel)测得。肾组织内相对casepase-3mRNA含量,由实时荧光定量多聚酶链反应法(real-time fluorescent quatitative reverse transcription polymerase chain reaction, FQ RT-PCR)测得。术后24h肾组织标本经HE染色观察病理变化。 [结果] 1、血清NGAL和肌酐浓度：CLP组大鼠自术后3h明显升高,分别为171.04±13.35 pg/mL和42.17±3.19umol/L,与Sham组相比(分别为57.93±13.77pg/mL和25.50±2.42μmol/L),CLP组明显高于Sham组,差别有统计学意义,P<0.05;黄芩苷干预组术后3h分别为112.77±17.32 pg/mL和37.83±4.54μmol/L,明显低于CLP组,差异有统计学意义,P<0.05。 2、大鼠肾组织TNF-α和NF-κB水平：CLP组大鼠术后3h即显著升高,TNF-α和NF-κB免疫组织化学指数(immunohistochemistry index)分别为53460.25±1936.97和30611.14±1682.88,明显高于Sham组(19103.82±1800.99和13752.87±1375.66),差别有统计学意义,P<0.05；黄芩苷干预组术后3h分别为28205.23±774.44和18907.09±1110.95明显低于CLP组,差异有统计学意义,P<0.05。 3、肾组织细胞凋亡率以及肾组织内相对casepase-3mRNA含量：CLP组大鼠术后3h肾组织细胞凋亡率和肾组织相对caspase-3mRNA含量均明显增高,分别为18.92±1.56%和3.323±0.240,明显高于Sham组(7.06±1.37%和1.310±0.130),差别有统计学意义,P<0.05；黄芩苷干预组术后3h分别为12.00±1.49%和1.900±0.171,明显低于CLP组,差异有统计学意义,P<0.05。 4、大鼠肾组织病理改变：术后24 h, CLP组大鼠肾脏病理可见部分肾小球系膜基质有所增加,系膜细胞增生,肾组织内大量炎性细胞浸润,部分肾小管细胞肿胀,空泡变性等改变；而黄芩苷+CLP组大鼠在术后24 h肾组织上述病理改变明显减轻。 [结论] 脓毒症早期应用黄芩苷对脓毒症大鼠急性肾脏损伤有保护作用。其机制可能与降低脓毒症大鼠肾组织TNF-α和NF-κB水平,减少casepase-3表达,从而减轻炎症反应以及减少脓毒症大鼠肾脏组织细胞凋亡有关。
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