目的:探讨CHB患者自然史不同阶段的血清外泌体中差异表达的miRNA及其临床意义。方法:2014年1月至2017年1月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心C HB初治患者92例,其中免疫耐受期24例,免疫清除期24例,低复制期24例,再活动期20例。采用ExoQuick试剂盒抽提250μL血清中的外泌体,通过蛋白免疫印迹法检测外泌体蛋白标志物LAMP2和TSG101的表达;实时荧光定量PCR技术检测miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c、miRNA-200c在血清外泌体中的表达。组间差异比较采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验;关联性分析采用皮尔逊相关系数;用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC曲线)来评估预测效能。结果:蛋白质免疫印迹法检测外泌体表面特异性标志物LAMP2和TSG101阳性。CHB患者血清外泌体中的miRNA-122(H=41.06)、miRNA-125a(H=29.31)、miRNA-29c(H=49.14)和miRNA-200c(H=31.73)在自然史不同阶段表达差异均有统计学意义(均P<0.01)。根据肝功能指标及肝穿刺结果,与无炎症组相比,炎症组血清外泌体的miRNA-122(U=804)、miRNA-29c(U=317)和miRNA-200c(U=574)均下调(均P<0.05),而miRNA-125a上调(U=279,P<0.01)。miRNA-200c与ALT呈负相关(r=-0.3932,P<0.01),而miRNA-125a与ALT呈正相关(r=0.5981,P<0.01)。通过ROC曲线来评价外泌体源miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c和miRNA-200c对炎症的诊断价值,曲线下面积分别为0.6193、0.8396、0.8243和0.6883,其中miRNA-125a曲线下面积最大,敏感度为84.62%,特异度为74.47%.而ALT区分肝穿刺有无炎性反应的ROC曲线下面积为0.7953,敏感度为81.08%,特异度为70.97%。结论:外泌体源性miRNA在CHB患者自然史不同阶段中的表达存在明显差异,与炎性反应相关的外泌体源miRNA有望成为诊断肝脏炎性反应的新型无创生物学标志物,帮助确定C HB患者临床用药治疗的最佳时机。
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