目的:应用小鼠肝星状细胞(HSC)与小鼠成体肝脏干细胞(AHPC)体外间接共培养模型,观察HSC旁分泌途径对AHPC增殖及代谢功能的影响。方法:分别建立HSC及AHPC细胞分离及培养模型。进一步选择Transwell6孔板,建立小鼠HSC与AHPC间接共培养模型。存共培养24h和96h后,计算AHPC克隆数及克隆形成率;共培养14d后,行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)增殖实验,计算AHPC细胞克隆内BrdU阳性的细胞数,评估细胞增殖能力。同时,收集细胞上清液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞代谢产物以评估细胞的代谢能力。通过以上方法比较HSC组和空白对照组中AHPC在克隆形成率、细胞增殖及代谢功能上的差异。结果:HSC组AHPC的克隆形成率为(26.88±3.31)%,对照组为(20.11±2.34)%(P<0.05)。BrdU增殖实验提示,对照组内BrdU/白蛋白双阳性细胞为(69.50±18.81)/高倍视野,较HSC组增多61.29%(P<0.01)。代谢功能方面,HSC组AHPC细胞上清液中自蛋白(Albumin)和尿素(Urea)的浓度分别为(14.17±3.14)mg/(L·d)和(34.83±11.41)mg/(L·d),比对照组分别提高72.17%和66.89%(P<0.05)。结论:一定数量的HSC在体外培养时能提高AHPC克隆形成率,促进细胞增殖分裂,细胞代谢功能亦相应增强。
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